NS asıl fark nitroselüloz ve naylon membran arasındaki nitroselüloz membranın protein bağlanması için yüksek bir afinitesi vardır, oysa naylon membranın nükleik asit bağlanması için yüksek bir afinitesi vardır. Ayrıca, hidrofobik ve elektrostatik etkileşimler makromolekülleri nitroselüloz membranlara bağlarken iyonik, hidrofobik ve elektrostatik etkileşimler makromolekülleri naylon membranlara bağlar.

Nitroselüloz ve naylon membran, makromoleküllerin jelden aktarıldığı iki tip membrandır. Ancak nitroselüloz membranlar, DNA ve RNA'yı bağlamak için de kullanılabilir.

Afinite, Biodyne A, Biodyne B, Nitroselüloz, Nükleik Asitler, Naylon, Gözenek Boyutu, Proteinler

Nitroselüloz Membran Nedir?

Nitroselüloz membran, yüksek protein bağlama afinitesi nedeniyle Western blotlamada kullanılan yaygın bir matristir. Bununla birlikte, hareketsizleştirilmiş proteinler ve glikoproteinler dışındaki nükleik asitleri saptamak için kullanılabilir. Makromoleküllerin immobilizasyonu esas olarak hidrofobik etkileşimler yoluyla gerçekleşir. Membranın nitro grupları ile proteinlerin amino asit yan zincirleri arasında da hidrojen bağları oluşur. Protein immobilizasyonu, yüksek tuz ve düşük metanol konsantrasyonlarında yüksek olacaktır.

Şekil 1: Blot Prensibi

Nitroselüloz membranlar, üniform olan yüksek bir yüzey alanına sahip %100 saf nitroselüloz formlarında mevcuttur. Mevcut ön boyutlar 0,2 μm ve 0,45 μm'dir. Küçük gözenek boyutu, küçük proteinlerle (<14 kDa) bağlanma için daha iyidir. Proteinlerin bağlanma ve tutma kapasitesi 80-250 μg/cm3'tür.². Önceden monte edilmiş membranlar kullanıma hazırdır. Nitroselüloz membranların ana avantajlarından biri, kolayca bloke edilebilmesi nedeniyle çok düşük arka planıdır. Desteklenen nitroselüloz membranlar soyulabilir ve yeniden düzenlenebilir.

Naylon Membran Nedir?

Naylon membran, nükleik asitlerin bağlanması için yaygın olarak kullanılan bir matristir. Naylon membranlar mekanik olarak nitroselüloz membranlardan daha güçlüdür. Blot işleminde kullanılan iki ana naylon membran türü Biodyne A ve Biodyne B'dir. Her iki türün de gözenek boyutu 0,45 μm'dir. Isıya ve solventlere karşı dayanıklıdırlar. Ayrıca büzülmez, çatlamaz veya yırtılmazlar. Her ikisi de nitroselüloz membranlardan daha düşük bir arka plan sağlar.

Şekil 2: Southern Blot Membran

Nitroselüloz ve Naylon Membran Arasındaki Benzerlikler

Nitroselüloz ve Naylon Membran Arasındaki Fark

Tanım

Nitroselüloz membran, blotlama işleminde nükleik asitleri ve proteinleri hareketsiz hale getirmek için kullanılan yapışkan bir zara karşılık gelirken, naylon zar, makromolekülleri hareketsiz hale getirmek için kullanılan yüksek mukavemetli ve ısı direncine sahip bir zar türünü belirtir.

Ondan yapılmış

Nitroselüloz membranlar nitratlı selülozdan yapılırken naylon membranlar modifiye edilmemiş veya pozitif yüklü Biodyne A ve Biodyne B naylondan yapılır.

Gözenek büyüklüğü

Nitroselüloz membranların gözenek boyutları 0,2 μm ve 0,45 μm iken naylon membranların gözenek boyutu 0,45 μm'dir.

Kuvvet

Nitroselüloz membranlar kırılgandır ve bu nedenle naylon membranlar mekanik olarak güçlüyken yeniden kullanılamaz.

Aktarma Yöntemi

Elektroforetik transfer esas olarak proteinlerin nitroselüloz membranlar üzerine transferinde kullanılırken kapiler transfer naylon membranlarda yaygın uygulamadır.

yakınlık

Nitroselüloz membranlar proteine ​​yüksek afiniteye sahipken, naylon membranlar nükleik asitlere yüksek afiniteye sahiptir. Nitroselüloz membranlar, nükleik asitler için de kullanılabilir.

lekeleme

Nitroselüloz membranlar Western blot için daha iyiyken naylon membranlar Southern ve Northern Blot için daha iyidir.

Bağlama Etkileşimleri

Hidrofobik ve elektrostatik etkileşimler makromolekülleri nitroselüloz membranlara bağlarken iyonik, hidrofobik ve elektrostatik etkileşimler makromolekülleri naylon membranlara bağlar.

Protein Bağlama Kapasitesi

Nitroselüloz zarın protein bağlama kapasitesi 80-250 μg/cm3'tür.² naylon zarın protein bağlama kapasitesi 150-200 μg/cm2 iken².

Çözüm

Nitroselüloz zar, esas olarak Western blotlamada proteini hareketsiz hale getirmek için kullanılan kırılgan bir zardır, naylon zar ise esas olarak nükleik asitleri hareketsiz hale getirmek için kullanılan güçlü bir zardır. Nitroselüloz membranlar molekülleri hidrofobik etkileşimler yoluyla bağlarken, naylon membranlar elektrostatik etkileşimler yoluyla molekülleri bağlar. Bu nedenle nitroselüloz ve naylon membran arasındaki temel fark, afinitedir.

Referans:

1. “Western Blotlama için Nitroselüloz Zarlar | Thermo Fisher Scientific – LK.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Burada Bulunmaktadır2. “Biodyne A Naylon Membran, 0.45 m, 8 Cm x 12 Cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Burada Bulunmaktadır3. “Biodyne B Naylon Membran, 0.45 m, 8 Cm x 12 Cm.” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, Burada Bulunmaktadır

Görünüm inceliği:

1. "Blot biyolojisi" Gbdivers tarafından - Commons Wikimedia2 aracılığıyla kendi çalışmanız (CC BY-SA 3.0). “Güney leke zarı” Bojan Žunar tarafından - Commons Wikimedia aracılığıyla kendi çalışması (CC BY-SA 4.0)