NS asıl fark normal faz ve ters faz kromatografisi arasındaki normal faz kromatografisi çok polar bir durağan faza ve bir polar olmayan mobil faza sahipken, ters faz kromatografisi polar olmayan bir durağan faza ve bir polar mobil faza sahiptir. Ayrıca, normal faz kromatografisinin durağan fazı esas olarak saf silikadır ve hareketli faz, kloroform gibi susuz bir çözücü iken, ters faz kromatografisinin sabit fazı, uzun hidrofobik uzun zincirli ve hareketli bir modifiye silika substrattır. faz esas olarak su, metanol veya asetonitrildir.

Normal ve ters faz kromatografisi, yüksek basınç altında çalışan iki tip HPLC (yüksek performanslı sıvı kromatografisi) yöntemidir. Genel olarak, normal sıvı kromatografisine kıyasla daha yüksek çözünürlük gücüne sahiptirler.

HPLC, Sıvı Kromatografisi, Mobil Faz, Normal Faz Kromatografisi, Ters Faz Kromatografisi, Sabit Faz

Normal Faz Kromatografisi Nedir?

Normal faz kromatografisi, bir HPLC tekniği türüdür. Analitleri, polar silika olan emici maddeyle etkileşim derecesine göre ayırır. Bu nedenle, bu tip kromatografinin durağan fazı hidrofiliktir. Ayrıca numune karışımındaki hidrofilik moleküller ile hidrofilik etkileşimler yapabilir. Genel olarak, bu etkileşimler hidrojen bağını, dipol-dipol etkileşimlerini vb. içerir. Bu nedenle, daha polar olmayan analitler, durağan fazda daha uzun süre kalır ve tutma süresini arttırır.

Şekil 1: Normal Faz ve Ters Faz Kromatografisi – Özellikler

Ayrıca normal faz kromatografisindeki mobil faz polar değildir ve susuzdur. Bu nedenle karışımdaki polar olmayan veya hidrofobik analitler, işlemin başlangıcında hareketli faz ile etkin bir şekilde yıkanır. Bu arada, mobil fazın artan polaritesi ile analitlerin alıkonma süresi azalır. Ayrıca, alıkonma süresinin zayıf tekrarlanabilirliği, normal faz kromatografisinin en büyük dezavantajıdır. Temel olarak, bu, silika yüzeyinde bir su tabakası veya protik organik çözücülerin varlığından kaynaklanır. Ancak bu, ters faz kromatografisinde elimine edilir.

Ters Faz Kromatografisi Nedir?

Ters faz kromatografisi, yakın tarihli bir HPLC türüdür. Normal faz kromatografisi ile karşılaştırıldığında, alıkonma süresinin tekrarlanabilirliği artmıştır. Temel olarak, bu tekrarlanabilirlik artışı, durağan fazın polar olmayan hale getirilmesiyle elde edilir. Bunu yapmak için, silika durağan fazın yüzeyi, R'nin C18H37 veya C8H17 gibi bir düz zincirli alkil grubu olduğu RMe2SiCl olarak değiştirilir. Bununla birlikte, durağan fazın polar olmayan doğası nedeniyle, numune karışımındaki daha az polar analitler, normal faz kromatografisinin aksine daha yüksek alıkonma süresine sahip olma eğilimindedir.

Şekil 2: Ters Faz Kromatografisi – Elüsyon

Normal Faz ve Ters Faz Kromatografisi Arasındaki Benzerlikler

Normal Faz ve Ters Faz Kromatografisi Arasındaki Fark

Tanım

Normal faz kromatografisi, bir karışımın bileşenlerinin, biri polar sabit faz, diğeri ise hareketli faz polar olmayan iki faz arasında dağılımına izin veren bir ayırma yöntemini ifade eder. Buna karşılık, ters faz kromatografisi, hareketli fazı durağan fazdan daha polar olan ayırma yöntemini ifade eder.

Evrim

Normal faz kromatografisi, 1970'lerde sıvı kromatografi şeklinde geliştirildi. Ancak, ters faz kromatografisi, yakın zamanda geliştirilmiş bir HPLC formudur.

Durağan faz

Ayrıca, normal faz kromatografisi, esas olarak saf silika olan bir polar durağan fazı kullanırken, ters faz kromatografisi, uzun hidrofobik uzun zincirlere sahip modifiye edilmiş bir silika substratı olan polar olmayan bir durağan fazı kullanır.

Mobil aşama

Normal faz kromatografisi, hareketli faz olarak, esas olarak kloroform olan polar olmayan, susuz bir çözücü kullanırken, ters faz kromatografisi, esas olarak su, metanol veya asetonitril olan bir polar mobil faz kullanır.

Ayırma Türleri

Mobil Fazdaki Analitler

Normal faz kromatografisinde, mobil faz ayırmanın başlangıcında polar olmayan analitleri taşırken, ters faz kromatografisinde mobil faz polar analitleri taşır.

Tutma Süresinin Artırılması

Polar olmayan bir mobil faz, normal faz kromatografisinin alıkonma süresini arttırırken, polar bir mobil faz, ters faz kromatografisinin alıkonma süresini arttırır.

elüsyon

Analitler, normal faz kromatografisinde mobil fazın polaritesi artırılarak ayrıştırılabilirken, ters faz kromatografisinde mobil fazın polaritesi azaltılarak analitler ayrıştırılabilir.

Sabit Faz Özellikleri

Normal faz kromatografisinin durağan fazı, bir su veya protik organik solvent tabakası içerirken, ters faz kromatografisinin sabit fazı, su veya bir protik solvent tabakası içermez.

Tutma Süresinin Tekrarlanabilirliği

Sütunun Hasarı

Normal faz kromatografi kolonunun zarar görmesi kolaydır, ters faz kromatografi kolonunun zarar görmesi zordur.

Çözüm

Normal faz kromatografisi, polar sabit faz ve polar olmayan mobil faz kullanan bir HPLC türüdür. Bunun bir sonucu olarak, karışımın polar olmayan analitleri, durağan fazın emicisine doğru etkileşim derecesine bağlı olarak polar analitlerin ayrılmasına izin verirken, kolondan kolayca dışarı hareket eder. Öte yandan, ters faz kromatografisi, polar olmayan durağan bir faz ve bir polar mobil faz kullanan yeni bir HPLC türüdür. Bu nedenle, polar analitler, hareketli faz ile birlikte kolondan dışarı hareket ederek, durağan faz ile etkileşim derecesine bağlı olarak polar olmayan analitlerin ayrılmasına izin verir. Bu nedenle, normal ve ters faz kromatografisi arasındaki temel fark, sabit ve hareketli fazların türüdür.

Referanslar:

1. “HPLC Ayırma Modları.” Sular, Burada Mevcuttur.

Görünüm inceliği:

1. "HILIC Kullanımları ve Yararları" Chem461S16Group4 - Commons Wikimedia aracılığıyla kendi çalışması (CC BY-SA 4.0) 2. "Ters Faz Gradyan Elüsyon Şeması" Nategm'e göre - Commons Wikimedia aracılığıyla kendi çalışması (CC BY-SA 4.0)