Ana Fark - Klonlama Vektörü ve İfade Vektörü

Klonlama vektörü ve ekspresyon vektörü, yabancı DNA segmentlerini bir hedef hücreye taşımak için rekombinant DNA teknolojisinde kullanılan iki tip vektördür. Hem klonlama hem de ekspresyon vektörleri, vektör dizilerinde replikasyonun orijinini, benzersiz kısıtlama bölgelerini ve seçilebilir markör genini içerir. Hem klonlama hem de ifade vektörleri, bir replikasyon kaynağının mevcudiyeti nedeniyle kendi kendini kopyalar. Klonlama vektörleri, plazmitler, kozmitler veya bakteriyofajlar olabilir. NS asıl fark klonlama vektörü ve ekspresyon vektörü arasındaki klonlama vektörü, yabancı DNA parçalarını bir konak hücreye taşımak için kullanılırken, ekspresyon vektörü, maksimum gen ekspresyonu ile uygun ekspresyon sinyallerini içeren bir klonlama vektörünün bir türüdür.

Kapsanan Kilit Alanlar

1. Klonlama Vektörü Nedir? - Tanım, Türler, Kullanımlar 2. İfade Vektörü Nedir? - Tanım, Türler, Kullanımlar 3. Klonlama Vektörü ve İfade Vektörü arasındaki benzerlikler nelerdir? – Ortak Özelliklerin Anahatları 4. Klonlama Vektörü ve İfade Vektörü arasındaki farklar nelerdir? – Temel Farklılıkların Karşılaştırılması

Anahtar Terimler: Bakteriyofajlar, Klonlama Vektörü, Kozmidler, DNA, DNA Teknolojisi, Ekspresyon Yapısı, Ekspresyon Vektörü, Replikasyonun Kökeni, Promoter Bölge, Rekombinant RNA, Plazmitler, Kısıtlama bölgeleri, Seçilebilir işaretleyici

Klonlama Vektörü Nedir?

Klonlama vektörleri, taşıyıcı DNA molekülleri olarak hizmet eder. Tüm klonlama vektörleri dört özel özellik taşır:

Amaca bağlı olarak plazmitler, fajlar ve kozmidler gibi birçok klasik klonlama vektörü seçeneği vardır. Klonlama vektörünün seçimi, ekin ve uygulamanın boyutuna bağlıdır.

plazmitler

Plazmitler, bakteri hücrelerinin içinde otonom olarak çoğalma yeteneğine sahip, doğal olarak oluşan, kromozom dışı, çift sarmallı DNA molekülleridir. Plazmitlerdeki ekin boyut sınırı 10 kb'dir. Plazmitler, alt klonlama ve akış aşağı manipülasyon, cDNA klonlama ve ekspresyon deneylerinde klonlama vektörleri olarak kullanılır. pBR322, rekombinant DNA teknolojilerinde kullanılmak üzere genetik olarak tasarlanmış ilk plazmitlerden biridir. pBR322 plazmidi, şekil l'de gösterilmektedir.

Şekil 1: pBR322

fajlar

Fajlar, bakteriyofaj lambdanın cos bölgesinin bir faj kafasına paketlenmesine izin verdiği bakteriyofaj lambdadan türetilir. Vektör DNA'nın konak hücre içinde replikasyonu, sonuçta hücre lizisine neden olacaktır. Bir faj vektörüne eklenebilen ekin boyutu 5-12 kb'dir. Faj vektörleri, genomik DNA klonlama, cDNA klonlama ve ifade kitaplıklarında kullanılır.

kozmidler

Kozmitler, bakteriyofaj lambda cos bölgesini içeren bir tür plazmittir. Bakteriyofaj lambdanın cos bölgesi, onun bir faj kafasına paketlenmesine izin verir. Bir plazmit olmasına rağmen, konak hücre içindeki kozmidlerin replikasyonu, hücreyi faj vektörlerinde olduğu gibi parçalamayabilir. Bir kozmid vektöre klonlanabilen ekin boyutu 35-45 kb'dir. Kozmid vektörler, genomik kütüphane yapılarında kullanılır.

Memeli genlerinin boyutu genellikle 100 kb'den büyük olduğundan, tam gen dizisi klasik klonlama vektörleri ile klonlanamaz. Bu problem, konak hücre kromozomlarının özelliklerini vektörlere taklit ederek çözülür. Bu tür vektörlere yapay kromozom vektörleri denir. BAC'ler (bakteriyel yapay kromozom vektörleri), YAC'ler (maya yapay kromozom vektörleri) ve MAC'ler (memeli yapay kromozom vektörleri), yapay kromozom vektörlerinin türleridir.

BAC'ler

Bakteriyel yapay kromozom vektörleri, Escherichia coli F faktör plazmitine dayanır. Bir BAC vektörüne klonlanabilen ekin boyutu 75-300 kb'dir. BAC vektörleri, büyük genomların analizinde kullanılır.

YAC'ler

Maya yapay kromozom vektörleri, Saccharomyces cerevisiae centromere, telomer ve diğer otonom olarak replike olan dizilere dayanmaktadır. Bir YAC vektörüne klonlanabilen ekin boyutu 100-1 Mb'dir. YAC vektörleri, büyük genomların analizinde kullanılır.

MAC'ler

Memeli yapay kromozom vektörleri, memeli sentromerine, telomerine ve replikasyonun kökenine dayanır. MAC'lerdeki kesici uç boyutu 100 kb ila 1 Mb'dir. MAC'ler hayvan biyoteknolojisinde ve insan gen terapisinde kullanılır.

İfade Vektörü Nedir?

İfade vektörleri olarak da adlandırılır ifade yapısı, bir plazmit türüdür. Özel bir gen, ekspresyon vektörleri tarafından bir konak hücreye dahil edilir; burada transforme edilen genin ekspresyonu, ekspresyon vektörü tarafından hücresel-transkripsiyonel ve translasyonel makinelerin kullanılmasıyla kolaylaştırılır. Bir ekspresyon vektörü, verimli bir gen ekspresyonuna yol açan güçlendiriciler ve promotör bölgeler gibi düzenleyici sekanslar içerir. Bir konak hücre içinde insülin gibi belirli bir proteinin ekspresyonundan sonra ürün, konak hücrenin proteinlerinden arındırılmalıdır. Bu nedenle, tanıtılan protein ya histidin (His etiketi) ya da başka herhangi bir protein ile etiketlenir. Bir konakçı hücre içinde verilen genin etkili bir ifadesini elde etmek için, aşağıdaki ifade sinyallerinin bir ifade vektörüne verilmesi gerekir.

Şekil 2: pGEX-3X

Klonlama Vektörü ve İfade Vektörü Arasındaki Benzerlikler

Klonlama Vektörü ve İfade Vektörü Arasındaki Fark

Tanım

Klonlama Vektörü: Klonlama vektörü, bir konakçı hücre içinde stabil bir şekilde muhafaza edilebilen küçük bir DNA parçasıdır. Ekin çok sayıda kopyasını alırken genleri hücrelere sokmak için kullanılır.

İfade Vektörü: Ekspresyon vektörü, belirli bir geni bir hedef hücreye sokmak için kullanılan ve ilgili gen ürününü üretmek için hücrenin mekanizmalarını yöneten bir plazmittir.

rol

Klonlama Vektörü: Klonlama vektörleri, eklenen DNA segmentinin çok sayıda kopyasını elde etmek için kullanılır.

İfade Vektörü: Ekspresyon vektörleri, bir protein veya RNA gibi, eklenen DNA segmentinin gen ürününü elde etmek için kullanılır.

Türler

Klonlama Vektörü: Klonlama vektörleri, plazmitler, kozmitler, fajlar, BAC'ler, YAC'ler veya MAC'ler olabilir.

İfade Vektörü: Ekspresyon vektörü bir plazmit vektörüdür.

Vektörün Özellikleri

Klonlama Vektörü: Klonlama vektörleri, bir replikasyon orijini, benzersiz kısıtlama siteleri ve seçilebilir bir işaretleyici içerir.

İfade Vektörü: Ekspresyon vektörü, bir klonlama vektörünün tipik özelliklerine ek olarak vektördeki geliştiriciler, promotör bölgesi, sonlandırma kodonu, transkripsiyon başlatma dizisi ve translasyon başlatma dizisi içerir.

Çözüm

Klonlama vektörleri ve ekspresyon vektörleri, yabancı DNA segmentlerini hedef hücrelere sokmak için rekombinant DNA teknolojisinde kolaylıkla kullanılır. Hem klonlama vektörleri hem de ekspresyon vektörleri, konakçı hücre içinde kendi kendilerine çoğalma yeteneğine sahiptir. Klonlama vektörleri tipik olarak, tanıtılan genin sayısız kopyasını elde ederken yabancı genleri hedef hücrelere sokmak için kullanılır. Ekspresyon vektörleri, konak hücrenin içine sokulan genin bir proteini veya RNA'sı olan gen ürününü elde etmek için kullanılır. İnsülin gibi rekombinant proteinlerin çoğu, ekspresyon vektörlerinin kullanılmasıyla üretilir. Klonlama vektörü ile ekspresyon vektörü arasındaki temel fark, her vektörün rekombinant DNA teknolojisinde uygulanmasıdır.

Referans:

1. “Klonlama Vektörleri.” Genlerin Klonlanması ve Moleküler Analizi. N.p., n.d. Ağ. Burada mevcut. 18 Haziran 2017. 2. “Shuttle Vektörler ve İfade Vektörleri.” Sınırsız. Sınırsız, 26 Mayıs 2016. Web. Burada mevcut. 18 Haziran 2017.

Görünüm inceliği:

1. “PBR322” Ayacop (+ Yikrazuul) – Commons Wikimedia2 aracılığıyla kendi eseriniz (Public Domain). “PGEX-3X klonlama vektörü” Magnus Manske tarafından - Commons Wikimedia aracılığıyla Magnus Manske (CC BY-SA 3.0) tarafından düzenlendi